通道載玻片--新的免疫熒光方法
細(xì)胞的免疫熒光實(shí)驗(yàn)是一個(gè)基礎(chǔ)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，傳統(tǒng)的方法是在培養(yǎng)板中放入預(yù)先處理好的蓋玻片，待細(xì)胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開(kāi)始進(jìn)行固定，染色等系列工作。
現(xiàn)在分享一種簡(jiǎn)便的免疫熒光方法，無(wú)需爬片，培養(yǎng)-操作-鏡檢，在一個(gè)培養(yǎng)皿/載玻片上完成所有工作！一氣呵成！
使用如圖的培養(yǎng)皿和載玻片，免疫熒光步驟將簡(jiǎn)化為：
1.直接細(xì)胞培養(yǎng)
2.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
3.固定細(xì)胞
4.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
5.染色
6.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
7.凍存液處理細(xì)胞
8.直接鏡檢觀(guān)察
免去了指甲油封片的傳統(tǒng)免疫熒光方法中的冗長(zhǎng)步驟：
1.無(wú)需對(duì)蓋玻片和載玻片消毒滅菌
2.無(wú)需對(duì)蓋玻片進(jìn)行包被
3.無(wú)需等細(xì)胞爬片
4.無(wú)需指甲油封片
之所能如此簡(jiǎn)便完成免疫熒光實(shí)驗(yàn)，是因?yàn)檫@些ibidi培養(yǎng)皿和載玻片的底部為特殊處理的材質(zhì)，絕大多數(shù)細(xì)胞可以直接貼壁生長(zhǎng)，而不需要另外包被。同時(shí)，這些耗材的底部薄如蓋玻片，可以直接使用倒置顯微鏡進(jìn)行觀(guān)察，得到高質(zhì)量的成像，適用于顯微鏡比如共聚焦顯微鏡。
成像效果：
下面再分享一種極致的免疫熒光方法，不僅更加簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，而且可以節(jié)約試劑和細(xì)胞，同時(shí)還能得到理想的成像效果。
如圖的ibidi通道載玻片，簡(jiǎn)單快速完成免疫熒光實(shí)驗(yàn)。
步驟：培養(yǎng)-固定-染色-鏡檢，只需在這個(gè)載玻片上進(jìn)行4個(gè)步驟，免疫熒光實(shí)驗(yàn)輕松完成~
優(yōu)點(diǎn)總結(jié)：
1、節(jié)約細(xì)胞和試劑
ibidi通道載玻片里的通道只有400μm高，以μ-slide VI為例，通道的容積只有30μl，而普通8well的腔式載玻片一個(gè)孔的容積有300μl。這意味著通道需要的試劑和細(xì)胞量?jī)H需約十分之一！對(duì)于非常珍貴的細(xì)胞和試劑來(lái)說(shuō)，這可是非常重要的。
2、成像效果好
使用通道載玻片時(shí)，能在相差顯微鏡下獲得更好的成像效果。因?yàn)橥ǖ郎舷露际瞧教沟模粫?huì)因?yàn)榘家好娴恼凵洮F(xiàn)象影響到相差顯微鏡成像。而well式的開(kāi)放小室的相差成像會(huì)受到培養(yǎng)皿蓋和液面的折射現(xiàn)象影響。
3、胞分布均勻
在通道載玻片中，由于沒(méi)有培養(yǎng)皿壁的影響，鋪入細(xì)胞后，不需要平時(shí)的混勻操作，細(xì)胞的分布就非常均勻了。而使用開(kāi)放小室，有可能在鋪細(xì)胞混勻后，細(xì)胞還是會(huì)聚集在小室的邊緣或中心上。如下圖所示。a 是明場(chǎng)相差成像，b為熒光成像。
免疫熒光本身就是個(gè)十分基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)，如今的科技更是便利了實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)也發(fā)展了科技。
以上方法分享給有需要的，奔跑在科研前沿的童鞋們~更快更省地做好免疫熒光噢！
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